Práctica 10 Prueba de KOH

INTRODUCCIÓN

Los hongos están constituidos por células  con una estructura de célula eucariota con el material genético distribuido en un núcleo y con una membrana celular rígida. Se dividen en dos grupos los mohos (hongos filamentosos) y las levaduras.  Los mohos están constituidos por filamentos multinucleados denominados hifas que se reproducen continuamente por sus extremos y con frecuencia se arborizan. Las levaduras se reproducen por gemación y ocasionalmente pueden formar filamentos o pseudohifas.

Para el diagnóstico de las infecciones fúngicas superficiales se utilizan una serie de métodos que sirven para confirmar el diagnóstico clínico y que incluyen: 

1) examen clínico y con luz de Wood,         2) examen directo           3) cultivo.

Práctica 9 Cultivo De Hongos

OBJETIVO

Los alumnos realizaran un cultivo de hongos, en el que se cultivaran por unos cuantos días; se observaran los resultados.

INTRODUCCIÓN

La rama de la microbiología que estudia los hongos (reino Fungi) se conoce como la micología.  Los hongos se clasifican en 4 grupos principales a base de su modo de reproducción sexual:

• Phycomycetes: mohos (“molds”) del agua, del pan y trerrestres. Las esporas reproductivas son externas y descubiertas. 
• Ascomycetes: levaduras (“yeast”) y mohos.  Poseen esporas sexuales llamadas ascoesporas.  Estas se producen en sacos llamados ascos.
• Basidiomycetes: setas. Forman esporas reproductivas conocidas como basidioesporas en estructuras llamadas basidios.
• Deuteromycetes: También llamados hongos imperfectos porque no tienen fase reproductiva sexual.

Práctica 8 Coprocultivo

FUNDAMENTO

Los coprocultivos que se realizan principalmente en casos de enterocolitis, los patógenos más comunes que causan diarrea son los géneros shigella, salmonella, Campylobacter y Escherichia coli.

En este cultivo se utilizan medios selectivos y diferenciales como el Agar Mac Conkey o el Agar EMB (Agar Azul De Metileno- Eosina) y Agar Sangre. También se puede utilizar el caldo de tetrationato, estos medios son selectivos porque permiten el crecimiento de bacilos gram – pero inhiben el crecimiento de muchos moos gram +.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Práctica 7 Antibiograma

OBJETIVO

Determinar la sensibilidad a diversos antibióticos de un determinado microorganismo y comprender el concepto de antibiótico y su especificidad de acción sobre determinadas bacterias.

INTRODUCCIÓN

Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos, aunque se extiende a algunos quimioterapéuticos.

El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso, ya que no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias, hongos y virus a los agentes antimicrobianos, con frecuencia es necesario estudiar la sensibilidad individual de cada patógeno a estas drogas, pudiéndose elegir entonces el agente apropiado  que provee mayores posibilidades de una evolución favorable.

El antibiograma, una vez realizado, da la siguiente información:

• Grado de sensibilidad de la colonia bacteriana a un determinado antibiótico.
• Diferencia de sensibilidad por parte de la colonia a diferentes antibióticos.

Con esta información, se clasifica el efecto del antibiótico sobre esa determinada colonia en: Resistente (R), Intermedio (I) y Sensible (S).

Práctica 6 Técnicas de Sedimentación y Flotación

INTRODUCCIÓN

Métodos de Flotación

Los métodos de flotación fecal se utilizan para separar  los parásitos en todos sus estadios (huevos, quistes, larvas) de otros objetos, basados en sus diferentes densidades. La densidad es el peso de un parásito u otro objeto por unidad de volumen, se expresa en forma de gravedad específica.

• Solución salina saturada (Koffoyd yBarber)

Este método cualitativo da muy buenos resultados, es fácil de preparar y se conserva por largo tiempo. Este método es muy útil para la identificación de protozoarios, nematodos y algunos cestodos, tomar en cuenta que en esta solución no flotan algunos huevos como los de Taenia solium.

Práctica 5 Coproparasitoscopico Método de Faust

INTRODUCCIÓN

Las parasitosis intestinales son un conjunto de padecimientos causados principalmente por protozoarios y helmintos y considerados un problema de salud pública.

El examen coproparasitoscopico (CPS) es un conjunto de técnicas diagnósticas que constituyen la indicación para la identificación de la mayoría de las enteroparasitosis. Su eficacia y sensibilidad para establecer un diagnóstico correcto dependen de la adecuada indicación y preparación de la muestra, los datos clínicos y antecedentes de interés que sean aportados al laboratorio y de su correcta y completa ejecución con examen directo microscópico. 

Práctica 4 Coproparitoscopico Directo

INTRODUCCIÓN

Una enfermedad parasitaria o parasitosis es una enfermedad infecciosa causada por protozoos, vermes (cestodos, trematodos, nematodos) o artrópodos. Las parasitosis son estudiadas por la parasitología. No se consideran parasitosis las infecciones por hongos, bacterias o virus que, tradicionalmente, han sido estudiados por la microbiología.

La recogida de las heces requiere de una higiene íntima adecuada mediante la limpieza de la zona perianal y de los genitales externos con agua y jabón. El paciente debe orinar previamente a la defecación dado que las heces mezcladas con orina no serán útiles para el estudio pues pueden estar contaminadas por gérmenes del tracto urinario. El paciente deberá proceder a una nueva limpieza íntima tras la micción y antes de proceder a la defecación. Existen diferentes métodos para la recogida de muestras pero habitualmente al paciente se le aconseja el uso de un recolector de heces de plástico estéril (de venta en farmacias) que se coloca sobre el bidé o bien sobre un recipiente previamente desinfectado. El paciente deberá evitar el uso de sus manos para no contaminar la muestra por lo que deberá ayudarse mediante el uso de unos guantes de látex o de una espátula para la recolección y deberá depositar la muestra en un recipiente estéril específico para ello que será facilitado en el centro o en una farmacia.

El análisis de las heces consiste en la obtención de una muestra de heces procedentes del paciente que posteriormente será conservada en medios adecuados y llevada a analizar en un laboratorio especializado en este tipo de estudios.

Búsqueda de huevos y parásitos: se realiza mediante el uso de diferentes técnicas de laboratorio, permite detectar la presencia de larvas y huevos en las heces y la identificación del parásito.

Práctica 3 Lactobacilos

OBJETIVO
Conocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento e identificar lactobacilos en microscopio. Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.

ITRODUCCIÓN

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram. positivas como Gram negativas).

El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.

Práctica 2 Tinción de Ziehl Neelsen

INTRODUCCIÓN

La tinción de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para poner de manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras clínicas de pacientes.

Esta técnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

Ácido-alcohol resistencia es la propiedad física de algunas bacterias a la resistencia a la decoloración de la fucsina básica (rojo) la cual penetra en la célula por acción del fenol y el calor.

Las bacterias ácido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados según la tinciónde Gram, la cual es la técnica más común en la microbiología contemporánea, sin embargo puede ser teñido con algunas tinciones concentradas combinadas con calor. Una vez teñida tiene la capacidad de resistir la decoloración de una combinación de alcohol- ácido, el cual es el decolorante más común en los protocolos de tinción de bacterias, de donde viene el nombre Alcohol-ácido resistente.

Práctica 1 Tinción Gram

INTRODUCCIÓN

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de gram.

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram positivas y gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).