FUNDAMENTO
Los
coprocultivos que se realizan principalmente en casos de enterocolitis, los patógenos
más comunes que causan diarrea son los géneros shigella, salmonella, Campylobacter y Escherichia coli.
En
este cultivo se utilizan medios selectivos y diferenciales como el Agar Mac Conkey
o el Agar EMB (Agar Azul De Metileno- Eosina) y Agar Sangre. También se puede
utilizar el caldo de tetrationato, estos medios son selectivos porque permiten
el crecimiento de bacilos gram – pero inhiben el crecimiento de muchos moos
gram +.
TSI (Tres Azucares-Hierro)
Es
una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa, sacarosa y la
producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. El
cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo
indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color
del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos
concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son
suficientes para hacer virar el medio.
Si
se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en
el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden
a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentación.
La
producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro
debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.
LIA (Lisina-Hierro)
Es
un medio que sirve para demostrar la producción de dos enzimas: la lisinadescarboxilasa y la lisina desaminasa, además la presencia de sales de hierro
sirve para detectar la producción de H2S por algunos microorganismos.
La
descarboxilacion de la lisina ocurre en ambiente anaeróbico o sea en el fondo
del tubo y se pone de manifiesto por la alcalinización del medio produciendo un
viraje del indicador púrpura de bromocresol. La presencia de glucosa en los
componentes del LIA determina primero una reacción de fermentación, produciendo
acidificación y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable
para la reacción de descarboxilacion que ocurre después, volviendo a su color
violeta original la parte del fondo del tubo.
La
desaminacion de la lisina que se puede producir por los géneros Proteus y
Providencia tiene lugar en la parte superior del tubo produciendo acido a cetocarbonico
que al combinarse con la sal de hierro y en presencia de oxigeno forma un color
violeta rojizo. La producción de H2S se evidencia por la presencia de un
precipitado negro por utilización de las sales de hierro.
SIM (Sulfuro-Indol-Motilidad)
El
indol, es uno de los productos de la degradación metabólicas del amino acido
triptofano. Las bacterias que producen la enzima triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de Indol, acido piruvico y
amoniaco. La prueba del indo está basada en la formación de un complejo rojo
cuando el Indol reacciona con el grupo aldehído
p-dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs.
Los
microorganismos que poseen la enzima Ureasa tienen la capacidad de hidrolizar
la urea contenida en el medio con producción de amoniaco, para esta
prueba se utiliza el caldo urea de Stuart o Agar urea de christensen. El caldo Stuart
está estabilizado con sales de fosfato a un pH de 6.8. El microorganismo en
estudio debe producir cantidades relativamente grandes a fin de superar el
sistema estabilizador del medio y elevar el pH del medio los suficiente como
para virar el indicador (por encima de 8.0)
Este medio es capaz de diferencial entre un coliforme
fecal y los miembros del grupo de aerógenos, basándose en la utilización del
citrato. También se utiliza para la diferenciación de ciertos miembros del
grupo de Salmonella.
Para esta prueba se utiliza el Agar de Simmons, el cual contiene citrato de
sodio y azul de bromotimol como indicador. La única fuente de carbono en este
medio es el citrato. Si la reacción es positiva, el indicador se vuelve azul.
Los demás microorganismos no crecen y el medio conserva su color verde,
indicando una reacción negativa.
MIO (Movilidad- Indol- Ornitina)
Esta prueba
bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la
reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Son tres pruebas, en esta prueba se
evaluó la producción de indol, la descarboxilación de la lisina por la enzima
ornitina descarboxilasa y la movilidad del microorganismo.
La presencia de indol, degradación
del tripotofano para la enzima triptofanasa libera indol, acido pirúvico,
amoniaco y energía.
MATERIAL
- Caldo de tetrationato
- Medios de cultivo: Mac Conkey o EMB
- Colorantes para tinción Gram
- Asa bacteriológica
- caja petri
- Mechero
- Estufa bacteriológica o incubadora
- Microscopio
MÉTODO
- Recolectar en un frasco estéril una pequeña muestra de heces fecales.
- En un área estéril sembrar la materia fecal en caldo de tetrationato e incubar a 37°C por 24 hrs.
- Tomar una muestra con hisopo estéril y colocarla en los medios de cultivo de Mac conkey y Agar sangre. Sembrar por estría en 3 partes. Incubar a 37°C por 24 hrs.
- Observar macroscópicamente las características físicas (macroscópicamente) de las colonias y una vez seleccionadas realizar las pruebas bioquímicas para su identificación así como también antibiograma y frotis teñido con tinción Gram.
- Observar e interpretar las reacciones bioquímicas para su identificación y la sensibilidad del antibiograma.
OBSERVACIONES
RESULTADOS
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