OBJETIVO
Conocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento e identificar lactobacilos en microscopio. Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.
Conocer la técnica de tinción de Gram., conocer el procedimiento e identificar lactobacilos en microscopio. Utilizar correctamente los materiales en esta técnica de tinción.
ITRODUCCIÓN
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células
bacterianas (tanto Gram. positivas como Gram negativas).
El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las
células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal
violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los
organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí
lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para
hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gramnegativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas
y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o
rojas (si se usó, por ejemplo, safranina)
Basilos
Los bacilos son bacterias que tienen forma de bastón, cuando se observan al microscopio. Los bacilos se suelen dividir en:
• Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacárido.
• Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacárido (peptidoglicano).
• Aunque muchos bacilos son patógenos para el ser humano, algunos no hacen daño, pues son los encargados de producir algunos productos lácteos como el yogurt (lactobacilos).
Los bacilos son bacterias que tienen forma de bastón, cuando se observan al microscopio. Los bacilos se suelen dividir en:
• Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacárido.
• Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacárido (peptidoglicano).
• Aunque muchos bacilos son patógenos para el ser humano, algunos no hacen daño, pues son los encargados de producir algunos productos lácteos como el yogurt (lactobacilos).
MATERIALES
- Frotis ya realizado
- Soluciones de cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina.
- Microscopio
- Mechero de bunsen
- Aceite de inmersión
- Agua destilada
- Hisopo
- Portaobjetos
MÉTODO
1. Prepara el frotis y fijar a calor
2. Cubrir la preparación con la solución de cristal violeta durante 1min
3. Lavar con agua destilada
4. Cubrir el frotis durante con solución lugol durante 1min
5. Lavar con agua destilada
6. Escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violeta
2. Cubrir la preparación con la solución de cristal violeta durante 1min
3. Lavar con agua destilada
4. Cubrir el frotis durante con solución lugol durante 1min
5. Lavar con agua destilada
6. Escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violeta
7. Contrastar con la solución safranina
8. Lavar con agua destilada y secar al aire
9. Observar con el microscopio con una gota de aceite de inmersión en objetivo 100x
8. Lavar con agua destilada y secar al aire
9. Observar con el microscopio con una gota de aceite de inmersión en objetivo 100x
DIAGRAMA DE
FLUJO
RESULTADOS
Se observaron bacilos, de color rojo y por lo tanto los microorganismos
son gram negativos.
CONCLUSIÓN
Las bacterias (lactobacilos) que se observaron salieron de color rojo y eso quiere decir que son gran negativas y aprendimos como manejar la tinción de Gram.
BIBLIOGRAFÍA
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