INTRODUCCIÓN
En las células eucariotas, el ADN se encuentra
asociado con proteínas formando estructuras compactas denominadas cromosomas,
cada cromosoma consta de una sola molécula de ADN, cuya longitud se encuentra
en el orden de varios centímetros.
La
separación de ADN requiere de la disociación de esta molécula y las proteínas,
para lo cual se utilizan enzimas, detergente y alcohol.
Para
realizar la extracción de ADN, se requiere utilizar muestras biológicas que lo
contengan.
El
aislamiento de ADN es una de las etapas en la investigación en biología
molecular para el estudio de uno o más genes. El ADN celular total es usado
como patrón para hacer copias (llamados clones) de un gen particular. Esas
copias pueden ser luego separadas y usadas para estudiar la función de ese gen
particular.
MATERIAL
- 1 licuadora
- 1 vaso deprecipitado de 250 ml
- 2 probetas de 50 o 100 ml
- 2 tubos de ensayo grandes
- 100 mI de chícharos secos
- 200 ml de agua fría
- Alcohol etílico frío
- Detergente líquido para platos
- Cloruro de sodio
- Ablandador de carne
PROCEDIMIENTO
1. Licua
los chícharos secos, con aproximadamente 1 ml de cloruro de sodio y el agua
fría durante varios segundos hasta que los chícharos estén molidos. La sal
ayuda a que el ADN precipite cuando se agregue el alcohol.
2. Filtra
la pasta obtenida con un colador de plástico en un vaso de precipitado de 250
ml.
3. Agrega
alrededor de la sexta parte de esa cantidad (aproximadamente 30 ml) de
detergente líquido y mézclalo. Deja reposar la mezcla durante 10 minutos. La
licuadora separa las células, mientras que el detergente rompe las membranas celulares y nucleares que contienen al ADN (figura 1).
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| Figura 1. Acción del detergente en las células |
4. Vierte
una parte de la mezcla en un tubo de ensayo, (mide la cantidad aproximada).
5. Añade
una pizca de ablandador de carnes y agita la mezcla suavemente con una varilla
de vidrio. El ablandador de carnes contiene enzimas denominadas proteasas que
separan a las proteínas asociadas al ADN.
6. Ladea
el tubo de ensayo y vierte lentamente por las paredes alcohol etílico al 95 %
en una cantidad equivalente a la mezcla depositada en el tubo de ensayo. El ADN
precipita en la presencia de alcohol, debido a que no se disuelve en él. Esto
causa que el ADN se agregue en forma de fibras visibles a simple vista (figura
2).
7. Con una
aguja de disección toma una pequeña muestra de las fibras blancas, disgrégalas
sobre un portaobjetos y agrega una gota de naranja de acridina para observar en
el microscopio óptico en los objetivos 10X y 40X.
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| Figura 2. Fibras de ADN |
Actividades de Aprendizaje
1. ¿De qué
manera está organizado el ADN en los cromosomas de los eucariotas?
En células eucariotas el cromosoma recibe el nombre de cromatina. La cromatina consiste en fibras que contienen proteínas, ADN (en cantidades muy parecidas) y una pequeña porción de ARN. Las proteínas que se asocian al ADN son básicas y se llaman histonas.
Los seres
humanos tenemos 23 pares de cromosomas: 22 de ellos se llaman cromosomas
autonómicos y se heredan uno del padre y otro de la madre. Los cromosomas
dell par 23 se llaman cromosomas sexuales y son diferentes entre sí.
2.
Investiga que es la naranja de acridina y por qué se utiliza para identificar
ADN
es un colorante catiónico
selectivo para los ácidos nucleicos y útil para realizar
determinaciones sobre el ciclo
celular. Interacciona con el ADN y el ARN por intercalación dentro de la molécula o
por atracción electrostática, respectivamente.
BIBLIOGRAFÍA
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