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martes, 23 de julio de 2013

Práctica No. 24 Extracción de ADN de Chícharos Secos

INTRODUCCIÓN
En las células eucariotas, el ADN se encuentra asociado con proteínas formando estructuras compactas denominadas cromosomas, cada cromosoma consta de una sola molécula de ADN, cuya longitud se encuentra en el orden de varios centímetros.

La separación de ADN requiere de la disociación de esta molécula y las proteínas, para lo cual se utilizan enzimas, detergente y alcohol.
Para realizar la extracción de ADN, se requiere utilizar muestras biológicas que lo contengan.

El aislamiento de ADN es una de las etapas en la investigación en biología molecular para el estudio de uno o más genes. El ADN celular total es usado como patrón para hacer copias (llamados clones) de un gen particular. Esas copias pueden ser luego separadas y usadas para estudiar la función de ese gen particular.


MATERIAL

PROCEDIMIENTO
1. Licua los chícharos secos, con aproximadamente 1 ml de cloruro de sodio y el agua fría durante varios segundos hasta que los chícharos estén molidos. La sal ayuda a que el ADN precipite cuando se agregue el alcohol.
2. Filtra la pasta obtenida con un colador de plástico en un vaso de precipitado de 250 ml.
3. Agrega alrededor de la sexta parte de esa cantidad (aproximadamente 30 ml) de detergente líquido y mézclalo. Deja reposar la mezcla durante 10 minutos. La licuadora separa las células, mientras que el detergente rompe las membranas celulares y nucleares que contienen al ADN (figura 1).

Figura 1. Acción del detergente en las células

4. Vierte una parte de la mezcla en un tubo de ensayo, (mide la cantidad aproximada).
5. Añade una pizca de ablandador de carnes y agita la mezcla suavemente con una varilla de vidrio. El ablandador de carnes contiene enzimas denominadas proteasas que separan a las proteínas asociadas al ADN.
6. Ladea el tubo de ensayo y vierte lentamente por las paredes alcohol etílico al 95 % en una cantidad equivalente a la mezcla depositada en el tubo de ensayo. El ADN precipita en la presencia de alcohol, debido a que no se disuelve en él. Esto causa que el ADN se agregue en forma de fibras visibles a simple vista (figura 2).
7. Con una aguja de disección toma una pequeña muestra de las fibras blancas, disgrégalas sobre un portaobjetos y agrega una gota de naranja de acridina para observar en el microscopio óptico en los objetivos 10X y 40X.

Figura 2. Fibras de ADN

Actividades de Aprendizaje

1. ¿De qué manera está organizado el ADN en los cromosomas de los eucariotas?

En células eucariotas el cromosoma recibe el nombre de cromatina. La cromatina consiste en fibras que contienen proteínas, ADN (en cantidades muy parecidas) y una pequeña porción de ARN. Las proteínas que se asocian al ADN son básicas y se llaman histonas


Los seres humanos tenemos 23 pares de cromosomas: 22 de ellos se llaman cromosomas autonómicos y se heredan uno del padre y otro de la madre. Los cromosomas dell par 23 se llaman cromosomas sexuales y son diferentes entre sí.


2. Investiga que es la naranja de acridina y por qué se utiliza para identificar ADN

es un colorante catiónico selectivo para los ácidos nucleicos y útil para realizar determinaciones sobre el ciclo celular. Interacciona con el ADN y el ARN por intercalación dentro de la molécula o por atracción electrostática, respectivamente.

  
BIBLIOGRAFÍA

Genetic Science Learning Center’s http://learn.genetics.utah.edu/

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