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lunes, 22 de julio de 2013

Práctica No. 17 Uso del Espectrofotómetro

OBJETIVO
Entender el correcto uso, trato y mantenimiento del espectrofotómetro.

INTRODUCCIÓN
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado de agregación (solido, liquido gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.



Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.  La Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuales tiene una energía:

Efotón = h×n = h×cl λ

Dónde:
c es la velocidad de la luz, n es su frecuencia, l su longitud de onda y h= 6.6 10-34 J×s es la constante de Planck.

Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que las moléculas de esta sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.

Una molécula sólo puede absorber fotones cuya energía h×n sea igual a la energía de un estado molecular excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su estructura electrónica y que la distinguen del resto de moléculas. Como consecuencia, el espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad de cada sustancia o molécula.

Los espectros de absorción se miden mediante un instrumento denominado espectrómetro. Los instrumentos constan de una fuente de luz “blanca” caracterizada por un espectro de emisión continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso 325 nm-900 nm) y de un monocromador que actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz de longitud de onda fija, e intensidad, este haz penetra en la cubeta de análisis donde se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz mide la intensidad del haz a la salida lf.



La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que atraviesa la cubeta debido a la absorción de las moléculas de la muestra. El ritmo de absorción depende de la intensidad inicial de luz y de la concentración de moléculas. De esta manera, cuando un haz de luz de intensidad l recorre una distancia dL en una muestra con una concentración de moléculas [B], se produce una atenuación de intensidad dL dada por:

dL=-k.[B].l.dL

La constante k se denomina coeficiente de absortividad molar. La expresión anterior se puede integrar de la siguiente forma:



lo cual da lugar a la ley de Beer-Lambert para la absorción que relaciona la intensidad a la salida de la muestra l, con la intensidad inicial l, la concentración de moléculas y la distancia recorrida por la luz en la muestra, L:



El espectrofotómetro, en lugar de la intensidad, mide la absorbancia A que se define por:



La utilización de la absorbancia al realizar los espectros tiene la ventaja de ser directamente proporcional a la concentración de moléculas en la muestra.

Actividades de aprendizaje
  • ¿Qué es un fotón?

Es la partícula elemental responsable de las manifestaciones cuánticas del fenómeno electromagnético. Portadora de las formas de radiación electromagnéticas.
  • ¿Qué es absorbancia?
I es la intensidad de la luz con una longitud de onda específica  λ por una muestra (intensidad de la luz transmitida)
I0 es la intensidad de la luz antes de que entre a la muestra (intensidad de la luz incidente)

La intensidad de la radiación emitida por un cuerpo negro (o radiancia espectral) con una cierta temperatura T y frecuencia v, I(v,T))viene dada por la ley de Planck:


CONCLUSIÓN
Durante la práctica conocimos los usos y el mecanismo del espectrofotómetro. La manera en que funciona, sus partes y su mantenimiento.

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