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jueves, 19 de diciembre de 2013

Práctica 10 Prueba de KOH

INTRODUCCIÓN
Los hongos están constituidos por células  con una estructura de célula eucariota con el material genético distribuido en un núcleo y con una membrana celular rígida. Se dividen en dos grupos los mohos (hongos filamentosos) y las levaduras.  Los mohos están constituidos por filamentos multinucleados denominados hifas que se reproducen continuamente por sus extremos y con frecuencia se arborizan. Las levaduras se reproducen por gemación y ocasionalmente pueden formar filamentos o pseudohifas.

Para el diagnóstico de las infecciones fúngicas superficiales se utilizan una serie de métodos que sirven para confirmar el diagnóstico clínico y que incluyen: 

1) examen clínico y con luz de Wood,         2) examen directo           3) cultivo.


El examen clínico nos permite ver la existencia de pequeñas lesiones descamativas en los márgenes de la lesión cutánea, en ocasiones es posible observar pústulas foliculares en los márgenes de la lesión. A nivel del cuero cabelludo suelen observarse áreas de alopecia donde el pelo se puede desprender con facilidad. 

1.    El examen con luz de Wood confiere a las áreas afectas una fluorescencia verdosa o rojo coral.
2.    El examen directo con KOH consiste en la toma de muestras: escamas, pelos o fragmentos de uñas, su incubación con hidróxidopotásico al 10-30% y su posterior visualización en el microscopio, lo que permite observar la existencia de hifas septadas (dermatofitosis), formas levaduriformes o pseudohifas (candidiasis) que son suficientes para confirmar el diagnóstico.
3.    El cultivo se realiza en medios apropiados como el glucosado de Sabouraud y el agar-urea, en donde las características de las colonias aisladas, tanto en su morfología, color y su examen microscópico permite la determinación del agente etiológico.


Es el método más sencillo para saber que un hongo es el causante de la infección a estudiar. Este se realiza colocando el material, como escamas, uñas y pelos en un portaobjetos al cual se agrega una gota de KOH (hidróxido de potasio) al 10 ó 20%; esta sustancia sirve para disolver el material de fondo y así poder observar mejor los elementos fúngicos, en algunos laboratorios se añade DMSO (dimetilsulfóxido) en una proporción de 60/4 lo cual facilita la absorción del KOH. Sobre la muestra se coloca un cubreobjetos y se observa con el microscopio de luz a un aumento de 10x ó 20x para localizar las estructuras del hongo y luego estudiamos el campo sospechoso a un aumento de 40x.


MATERIAL
·         3 portaobjetos
·         3 cubreobjetos
·         Asa bacteriológica
·         Muestra


MÉTODO
1.    Colocar una gota de KOH al 10% en el portaobjetos.
2.    Con el asa bacteriológica tomar una pequeña cantidad de muestra y colocarla en el portaobjetos con KOH.
3.    Colocar encima el cubreobjetos.
4.    Esperar 15 minutos.
5.    Observar al microscopio.



OBSERVACIONES


Candida albicans



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