Práctica 12 Manejo, Cuidados y Mantenimiento de la Centrifuga

OBJETIVO

Conocer y aprender el debido uso que se le da a una centrifuga, así como los cuidados y manejo al utilizarla y cargarla de forma adecuada.

INTRODUCCIÓN

La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento rotatorio de una fuerza de mayor intensidad que la gravedad, provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad.

La centrífuga se ha diseñado para utilizar la fuerza centrífuga –fuerza que se genera cuando un objeto rota alrededor de un punto-, para separar sólidos suspendidos en un medio líquido por sedimentación o para separar líquidos de diversa densidad. Los movimientos rotacionales permiten generar fuerzas mucho más grandes que la gravedad, en periodos controlados de tiempo. En el laboratorio las centrífugas se utilizan, en general, en procesos como la separación por sedimentación en los componentes sólidos de los líquidos biológicos y, en particular, en la separación de los componentes de la sangre: glóbulos rojos, glóbulos blancos, plasma y plaquetas, orinas entre otros, y para la realización de múltiples pruebas y tratamientos.

Hay diversas clases de centrífugas, entre las que se citan las siguientes: la centrífuga de mesa, la ultracentrífuga, la centrífuga para microhematocrito y la centrífuga de pie, que son las de más amplio uso en los laboratorios de salud pública, de investigación y clínicos, entre otros.

Componentes de la Centrífuga

1. El control eléctrico/electrónico que dispone generalmente de los siguientes elementos:

Control de encendido y apagado, control de tiempo de operación (temporizador), control de velocidad de rotación (en algunas centrífugas), control de temperatura (en centrífugas refrigeradas), control de vibraciones (mecanismo de seguridad) y sistema de freno.

2. Sistema de refrigeración
3. Sistema de vacío
4. Base
5. Tapa
6. Carcaza
7. Motor eléctrico
8. Rotor

Rotores de ángulo fijo

Mantienen los tubos en un ángulo fijo que por diseño está especificado entre los 20 y los 45 grados. Se utilizan para sedimentar partículas subcelulares.

Servicios requeridos

Las centrífugas requieren para su normal operación de lo siguiente:

1. Acometida eléctrica con capacidad adecuada al consumo del equipo, que suministre voltaje estable de tipo monofásico o trifásico –depende del modelo y especificación dada por el fabricante-. Por lo general, utilizan 110V o 220 V/60 Hz.

2. Un ambiente limpio, libre de polvo que disponga de piso firme y nivelado.

3. Un mueblen el cual puedan guardarse los accesorios que, como los rotores alternos, complementan la dotación de las centrífugas.

Cargado de la Centrífuga

La carga la centrífuga en una forma adecuada es muy importante para el funcionamiento correcto de la misma, y su preservación: Un procedimiento incorrecto, ocasiona que la centrífuga vibre durante el proceso de centrifugación, lo que daña al rotor que puede llevar a su sustitución. Un procedimiento correcto implica colocar las cargas en forma balanceada. La centrífuga está diseñada para obtener un balance cuando está en movimiento. Por eso es necesario cumplir los sig. requisitos:

• Colocar las cargas que tienen la misma masa o peso en forma opuesta al rotor, deben tener el mismo centro de gravedad.
• No coloque tubos como pares contrapuestos, que tengan diferente tamaño, forma, espesor, etc.
• Utilizar el rotor y accesorios originales del equipo. Las piezas no originales pueden producir un desbalance y acortamiento de la vida útil del equipo.

Otras recomendaciones

• Cuando este centrifugando mantenga cerrada la tapadera. Si algo se rompe apagar el equipo y no abra hasta que se detenga o el indicador de la tapadera lo indique. Es recomendable por bioseguridad esperar 30 minutos antes de abrir.
• Remplazar los recipientes metálicos (Camisas) que estén deformados, pues produce una presión no uniforme sobre el tubo de muestra.
• No utilice equipo de vidrio rallado o agrietado, por la presión centrífuga se produce una ruptura de estos puntos pulverizando el vidrio y contaminando.
• Comprobar que la superficie donde se tiene el equipo esté nivelada, ya que si sucede lo contrario causaría vibraciones.

Peligros que vienen asociados con la utilización de centrífugas

Los tubos utilizados pueden romperse, la rotura es más probable que ocurra si las instrucciones del fabricante no son seguidas, tales como el uso de tubos de tamaño no correcto y la no utilización de amortiguadores. Los rotores pueden descolocarse o fallar, posiblemente por la pérdida de una tuerca de sujeción o el emplazamiento de un tubo desequilibrado; el fallo del rotor o de algún tubo puede resultar sobre el operador en una exposición a riesgos físicos o infecciosos. El operador puede dañarse mientras intenta disminuir o parar la velocidad del rotor con la mano. Por este motivo, la tapa del equipo no debería ser abierta mientras el rotor está girando. Y si además existe una tapa de protección interna, usarla. También existen riesgos cuando la centrífuga no esté funcionando; por ejemplo, cristales rotos, posiblemente contaminados con sangre, que pueden ser encontrados dentro de la centrífuga durante la limpieza o la inspección y mantenimiento preventivo. Se deben cuidar que estén presentes las instrucciones de uso y mantenimiento, realizar la instalación y el montaje con las debidas medidas que garanticen la seguridad. Como mínimo las unidades deberían tener una tapa con enganche que prevenga a la centrífuga de ser abierta en el caso de un fallo mientras el rotor está dando vueltas. Una seguridad de bloqueo, la cual permite a la tapa ser abierta sólo después que el rotor haya parado o alcanzado una velocidad muy baja, es preferible, que todas las nuevas unidades tengan está característica.

MÉTODO

Siempre se han de seguir las precauciones universales sobre centrifugación de sangre o fluidos corporales. Estas precauciones incluyen llevar guantes, mascarillas de protección, trajes o batas de laboratorio, y delantales de plástico.

1.- Reunir los materiales y revisar que estén en buenas condiciones, limpios y secos.

2.- Rotular tres tubos de precipitados y agregar 10 ml de la mezcla problema.

3.- Tomando en cuenta las consideraciones del cargado de los tubos en la centrífuga, centrifugar de la sig. manera: Tubo 1 a 1000 rpm por 5 minutos, tubo 2 a 1500 rpm por 10 minutos y por último el tubo 3 a 2500 rpm por 10 minutos.

4.- Una vez centrifugados en tiempo y rpm anotar las observaciones del sobrenadante y el precipitado. Separar el sobrenadante por vertido anotar observaciones.

Centrifugación diferencial

DIAGRAMA DE FLUJO

1. Vaciar jugo en los tubos de ensayo cuidando que sea la misma cantidad ½ ó ¾.

2. Presionar el botón de la centrifuga para abrirla.

3. Colocar los tubos de ensayo dentro de la centrífuga uno frente a otro.

4. Cerrar la centrifuga, definir el tiempo y las RPM. La centrifuga se abrirá automáticamente una vez allá terminado. Decantar el sobrenadante de los tubos de ensaye.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Elabora una tabla de resultados involucrando todas las variables que se utilizaron para realizar la práctica.

Jugo y agua

PROCESO	VARIABLE
Llenado de tubos	½
Cantidad de tubos	6
Tiempo de centrifugación	10 min.
Revoluciones por min.	3,000 rpm
Sustancia	Jugo de naranja

Actividades

1. Consultar el mantenimiento preventivo y correctivo de la centrífuga.

-Limpiar la centrifuga usando un pañuelo humedecido.

-Revise que el mecanismo de la puerta funcione correctamente.

-Verifique que no exista la vibración excesiva.

-Verifique la alimentación eléctrica.

2. Elabora una tabla donde investigues 5 muestras biológicas que puedan ser sometidas a la centrifugación.

MUESTRA	REVOLUCIONES (por min.)	TIEMPO CENTRÍFUGANDO
Sangre	1500	5 min
Suero o plasma	8000	10 min
Orina	200	7 min
Hematocrito	3 500	30 min
Jugo	4 000	15 min

3. Explica el procedimiento para obtener un sedimento urinario.

• Agitar bien la muestra para suspender el sedimento y obtener 10-20 ml.
• Centrifugar a 1000-3000 kg por 15 min a 4°C para sedimentar la fracción celular.
• Descartar el sobrenadante y suspender el sedimento en 1 ml. de medio de transporte
• Utilizar esa muestra para inocular cultivos celulares.

CONCLUSIÓN

En la centrífuga se aplica la fuerza de gravedad para separar partículas por su diferencia de volumen y peso. De esta manera podemos aislarlos por decantación. Se usan dos tipos de unidades gravedad (1g) y revoluciones por minuto (RPM).