Práctica 6 Esterilización Manejo, cuidados y mantenimiento del autoclave

OBJETIVO

Conocer el procedimiento para la esterilización del material de Laboratorio.

INTRODUCCIÓN

La esterilización, procedimiento que consiste en destruir todos los gérmenes vivos que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos (asépticos). No se puede hablar de esterilización sin considerar el concepto de microorganismo. Un microorganismo es un agente microscópico vivo e imperceptible a los sentidos que generalmente está agrupado en colonias, aunque bien puede estar como una unidad formadora de colonias (U.F.C.), la que se desarrolla en un medio apropiado para formar colonias perceptibles. Los microorganismos pueden ser patógenos (productores de ciertas enfermedades) o inocuos (los habitualmente hallados en los alimentos, el aire, el polvillo ambiental, que no perjudica al hombre).

El calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares. El principal método de esterilización que emplea el calor húmedo es la esterilización por vapor a presión. Existen otros métodos de descontaminación que emplean este tipo de calor los cuales, aunque no permiten la destrucción total de los microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un material.

La esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en un autoclave. Estos equipos emplean vapor de agua saturado, a una presión de 15 libras lo que permite que la cámara alcance una temperatura de 121°C. El tiempo de esterilización usualmente es de 15 minutos, sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las características del material, es necesario variar el tiempo de esterilización.

Cuando se utiliza este método es importante controlar en el autoclave la relación entre la temperatura, la presión y el tiempo de exposición, ya que éstos son factores críticos en el proceso.

Sólo cuando el vapor se coloca bajo presión, es cuando su temperatura aumenta por encima de los 100°C y esto permite alcanzar las temperaturas de esterilización (121°C).

Entre las ventajas de este método de esterilización tenemos que no deja residuos, los autoclaves modernos son sencillos de manejar y es un método rápido de esterilización. Éste es el método de elección para esterilizar materiales termoestables y no sensibles a la humedad como medio de cultivo, cultivos de microorganismos para descartar, uniformes, instrumentos quirúrgicos, etc.

Entre sus desventajas están que no permite la esterilización de materiales sensibles al calor y materiales no miscibles con el agua como es el caso de polvos, aceites y grasas.

Precauciones

·         Antes de comenzar el proceso de esterilización es necesario remover todo el aire de la cámara del autoclave, porque de lo contrario no se pondrán alcanzarlas condiciones de esterilización requeridas debido a que la cámara interna del equipo no podrá ser saturada por el vapor del agua.

·         El tiempo de esterilización se debe comenzar a contar una vez que se han alcanzado los 121°C en la cámara interna del autoclave.

·         Si van a esterilizar materiales tales como instrumentos quirúrgicos, equipos, etc. no se debe cubrir con materiales impermeables al agua como por ejemplo el papel de aluminio, porque éste no permite que el vapor tenga acceso al material y por lo tanto no se logrará la esterilización.

·         Cuando se coloca el material a esterilizar en el interior del equipo se debe garantizar la libre circulación del vapor de agua alrededor de todo el material.

Para controlar la esterilización por vapor a presión se emplean indicadores físicos tales como medidores de presión, termómetros, o termógrafos diarios para el control del proceso y son los indicadores biológicos los que permiten determinar si realmente se llevó a cabo en forma efectiva la esterilización. Entre los indicadores biológicos más utilizados para controlar el proceso de esterilización por vapor a presión, se encuentran las esporas de Bacillus stearothermophilus que son altamente resistentes a este proceso.

Se recomienda el uso de controles biológicos por lo menos una vez a la semana para verificar el buen funcionamiento del autoclave. En caso de que se sospeche de alguna falla se debe colocar un indicador biológico en cada carga de esterilización.

MÉTODO

1. Trasladar los materiales preparados en el trabajo práctico al área de esterilización. La autoclave se llenara con agua destilada a la marca establecida y se colocara sobre la parrilla de calentamiento.

2. Colocar los materiales preparados dentro del autoclave. El material debe colocarse correctamente dentro del equipo para que permita la correcta distribución del vapor del agua. Para ello se deben tomar las siguientes precauciones:

·         Distribuir el material en forma ordenada en toda la superficie interna disponible.

·         Evitar amontonar el material en un área específica. No colocar el material uno sobre el otro.

·         Evitar que el material toque las paredes del autoclave.

·         No preparar cestas con tubos donde éstos se encuentren demasiado apretados.

3. Colocar la ampolla del indicador biológico en el lugar que se considere más difícil que llegue el vapor. En esta práctica se verificará la esterilización a través de la cinta testigo. Cerrar el autoclave según las indicaciones del facilitador.

4. Se encienden los mecheros y se observa el manómetro, cuando la aguja marque 5 ATM se purga quitando con cuidado la válvula de seguridad se recomienda que primero incline la válvula, al hacer esto se escucha como se desplaza el vapor de agua, posteriormente retire totalmente la válvula de seguridad, una vez desplazado totalmente el vapor de agua se coloca nuevamente la válvula de seguridad y se esperar que se alcancen los 121°C (15 ATM de presión) y comenzar a contar el tiempo de esterilización, se recomienda 15 minutos para material común y 30 minutos para material contaminado, esto se logra regulando la flama del mechero de Fisher.

5. Cuando termine el tiempo de esterilización, apagar el autoclave.

6. Esperar que bajen la presión y la temperatura del equipo, la aguja marca cero para abrirlo y retirar el material.

7. Abrir cuidadosamente la tapa del autoclave. Seguir las instrucciones del facilitador.

8. Esperar que el material alcance la temperatura ambiente antes de almacenarlo.

DIAGRAMA DE FLUJO

1. Llenar el autoclave de agua hasta la marca.
2. Poner el autoclave en la parrilla y colocar los materiales dentro del autoclave.
3. Cerrar el autoclave y encender los mecheros.
4. Esperar a que la aguja del manómetro marque 5 ATM.
5. Purgar el autoclave quitando con cuidado la válvula de seguridad. Una vez desplazado el vapor, coloca la nuevamente.
6. Esperar a que se alcancen los 121°C o 15 ATM de presión y contar el tiempo de esterilización.
7. Apagar los mecheros y esperar que bajen la temperatura y presión.
8. Cuando la aguja marque cero abrirlo y retirar el material.

Cuestionario

1. ¿Qué tipo de material se puede esterilizar en el autoclave? Menciona ejemplos
El material que puede esterilizarse incluye placas de petri, matraces, pipetas de vidrio y objetos de metal. Pueden adquirirse de diversos proveedores cajas y cilindros metalicos que almacenen convenientemente el material durante la esterilización.

2. Explica el fundamento de la esterilización por calor húmedo.
El vapor mata las bacterias por desnaturalización de sus proteínas. El aire tiene una influencia importante en la eficacia de la esterilización porque su presencia modifica la relación presión/temperatura.

3. ¿Por qué es necesario ajustar el tiempo y la temperatura para lograr la esterilización?
Porque estos son factores críticos en el proceso. Solo cuando el vapor se coloca bajo presión su temperatura aumenta y esto permite la esterilización.

4. ¿Por qué se purga el autoclave?
Para desplazar el vapor del agua.

5. ¿Cuál es la función de la cinta testigo en la esterilización?
Verificar la eficiencia de la esterilización.

6. ¿Cuál es el efecto del calor húmedo en los microorganismos?
El calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas celulares.

7. Escribe ventajas y desventajas del método propuesto
Ventajas.- no deja residuos, el autoclave es sencillo de manejar y es rápido.
Desventajas.- no permite la esterilización de materiales sensibles al calor y no miscibles al agua.

8. ¿De que otra manera se puede comprobar de manera confiable y certera la eficiencia del método de esterilización?
Mediante las esporas de Bacillus stearothermophilus.

CONCLUSIÓN

Es sumamente importante la relación que existe entre la temperatura/presión. Los tiempos y la interacción del aire.