Práctica 10 Manejo, Cuidado y Mantenimiento del Microscopio

OBJETIVO

El alumno conocerá las partes del microscopio así como las funciones, el cuidado, manejo y su utilidad en el laboratorio.

INTRODUCCIÓN

El microscopio es un instrumento indispensable en el laboratorio, se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos, lo cual permite observar los detalles estructurales entre otros.

El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros componentes celulares, es un microscopio compuesto, el cual es provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación de la imagen.

A través de la refracción o reflexión de los rayos luminosos mediante el sistema de lentes del microscopio, se forma la imagen del objeto, que es más grande que el objeto mismo, permitiendo el examen de sus estructuras en detalle.

AMPLIFICACIÓN

La capacidad amplificadora de un microscopio compuesto es el producto del compuesto es el producto del aumento individual de los oculares y los lentes objetivos. Un microscopio tiene objetos con poder de resolución de 10X, 40X Y 100X y oculares de 10X, por lo cual es capaz de amplificar la imagen de la muestra 100, 400 y 1000 veces.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

Simple. Los primeros microscopios, construidos por Leeuwnhoek alrededor de 1675, eran simples, es decir, que contenían una sola lente o lupa.

Compuesto. Tienen varias lentes combinadas, capaces de producir grandes aumentos. Existen varios aditamentos utilizados en el microscopio óptico, aumentando su rendimiento como instrumento de observación, por ejemplo: Microscopio en Campo Oscuro, Microscopio de Contraste de Fases; Microscopio de Fluorescencia; Microscopio de Luz Ultravioleta; Microscopio de Interferencia, MicroscopioElectrónico.



Microscopio Óptico



Microscopio de Fluorecencia



Microscopio Electrónico




Microscopio Simple

SISTEMAS DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
1.-Sistema de soporte

2.-Sistema eléctrico

3.-Sistema mecánico

4.-Sistema óptico

Sistema de soporte

Este sistema incluye partes fundamentales como son: base, soporte y brazo, estas partes sirven para mantener en posición las partes ópticas esenciales. La base y el brazo son fuertes, para disminuir la vibración.

Sistema eléctrico

Existen varios tipos según el fabricante. Los hay desde un simple cableado que termina en un foco con un interruptor de encendido adaptado generalmente en la base del microscopio o bien sistemas sofisticados con reguladores de energía, reóstato y lógicamente lámparas especiales de alto costo. En el sistema eléctrico la fuente de luz se encuentra colocada debajo del objeto, este emite la luz que pasa por el condensador, para después iluminar la preparación. 

Sistema mecánico

Implica todos los accesorios que sean capaces de moverse para optimizar las funciones de las diferentes partes y sistemas del microscopio. Estos movimientos se hacen posibles gracias a engranes, bandas dentadas, cremalleras, rodamientos o barras de desplazamiento. Este sistema incluye oculares, platina, condensador, corredera de platina, revolver, diafragma.

• Oculares, tienen un sistema mecánico de simple rodamiento, junta o separa los oculares de acuerdo al operador.

• Platina, el sistema mecánico de la platina se acciona con el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico, el primero sube y baja la platina en forma amplia y variada mientras que el segundo da movimientos casi imperceptibles. La platina es la parte del microscopio donde se coloca la muestra que se va examinar, en ella se encuentran las pinzas de la platina que sirven para sujetar la muestra a examinar, también se encuentran los tornillos de desplazamiento de la platina, estos tienen la función de mover la muestra sobre la platina, hacia arriba, abajo, derecha o izquierda, hasta enfocar el campo adecuado.

• Condensador, normalmente se mueve por un sistema de cremalleras acercando o retirando el condensador de la base de la platina, ayuda a que la luz alcance la muestra, condensa y enfoca la luz a través de un gran lente que se halla debajo de la platina.

• Revolver, es un dispositivo mecánico donde están insertos los objetivos, tiene un sistema de rodamiento circular.

• Diafragma, sirve para controlar la luz a través del condensador, esta provisto de un sistema de laminillas sobrepuestas, cada una con un eje propio, de tal manera que al accionarlo por medio de una pequeña placa lateral, quede un hexágono libre que determina el diámetro para el flujo de luz.

Sistema óptico

Este sistema es lo que hace realidad que el microscopio cumpla su función y tiene dos etapas de aumento, la primera se encuentra en los objetivos y la segunda en los oculares.  

• Oculares, son tubos cortos, cada uno con dos lentes, son la parte que hace contacto con el observador, es el lugar por el que se observa. Los oculares están marcados “5X”, “10X”, etc. Indica que amplía la imagen del objetivo 5 veces, 10 veces, etc.

• Objetivos, la función de estos es delimitar el tamaño de la imagen, existen diversas graduaciones en los objetivos que son de 4, 10, 10, 40, y 100 aumentos.

• Objetivo de pequeño aumento ó “Seco Débil”. Útil para observar microorganismos grandes, p. Ej. Protozoarios. Este objetivo esta marcado con 10X, también se utiliza para enfocar la muestra a observar.

• Objetivo de gran aumento ó “Seco fuerte”. Este se utiliza para el examen de muestras suspendidas en gota de agua u otros líquidos (es importante que la muestra este protegida con el cubre objetos). Este objetivo esta marcado con 40X.

• Objetivo de inmersión de aceite. Este objetivo es indispensable para el examen de frotis teñidos, y requiere de una gota de aceite de inmersión para las observaciones, esta marcado con 100X.

Parted del Microscopio

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CUIDADOS Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

1.- Para transportar el microscopio a la mesa de trabajo deberá tomarse del brazo con la mano derecha y de la base con la mano izquierda, en posición vertical. Colocarlo en un extremo de la mesa a unos 10 cms. Del filo de la misma.

2.- Antes de usarlo, limpiar perfectamente la fuente de luz, la parte superior del condensador, oculares y objetivos con un paño limpio y humedecido con agua destilada, secar con papel absorbente. Si no quedaran perfectamente limpios se pueden limpiar las partes antes mencionadas con una torunda ligeramente humedecida con alcohol o acetona.

3.- No encender la fuente de luz, sino hasta que se vaya a usar.

4.- Colocar la muestra sobre la platina, sujetarla con las pinzas, girar el objetivo seco débil (10X).

5.- Ver por el ocular y controlar la cantidad de luz adecuada, moviendo el condensador y el diafragma.

6.- Desplazar suavemente la platina y enfocar con la ayuda del tornillo macrométrico hasta que se observe claramente la muestra. Hacer los ajustes finos con el tornillo micrométrico, registrar las observaciones.

7.- Con la ayuda del revolver girar el objetivo seco fuerte (40X) realizar ajustes con el tornillo micrométrico registrar las observaciones.

8.- Nuevamente girar el revolver al objetivo de inmersión en aceite, pero antes debe colocar una pequeña gota de aceite de inmersión sobre la muestra procurando que el gotero no toque la muestra evitando así la contaminación del reactivo, realizar ajustes con el tornillo micrométrico, registrar observaciones.

9.- Una vez terminadas las observaciones bajar la platina con la ayuda del tornillo macrométrico, retirar con mucho cuidado la muestra (desecharla según las indicaciones del instructor) y apagar el microscopio. Limpiar los oculares, objetivos y platina del microscopio. Enredar el cordón del sistema eléctrico sobre la fuente luminosa, entregar al maestro auxiliar.

NOTA. Cuando se utiliza el microscopio se debe quitar los guantes.

MATERIALES Y REACTIVOS

1.- Preparación de teñidas

2.- Portaobjetos

3.- Cubreobjetos

4.- Vaso de pp

5.- Aceite de inmersión

6.- Papel absorbente

7.- Hisopos

8.- Extrán

MÉTODO

1.- Siguiendo las indicaciones para el manejo del microscopio:

a) Observar una preparación teñida 10X, 40X y 100X

b) Observar una preparación de un corte de una hoja 10X y 40X


OBSERVACIONES





Células Vegetales 10x (Seco Débil)

Células Vegetales 40x (Seco Fuerte)



Bacterias 100x (Seco Débil)

Sangre 40x (Seco Fuerte)



Cuestionario

1.- Hacer un esquema del recorrido de la luz a través de un microscopio óptico compuesto.

2.- Consultar el fundamento y ejemplos de:

• Microscopía electrónica: La ventaja de los microscopios es que la longitud de onda del haz de luz es aproximadamente 1/200 lo cual aumenta la resolución.
• Microscopíaen campo oscuro: Utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen.
• Microscopía de luz ultravioleta: La imagen depende de la absorción de esa luz por las moléculas de la muestra.
• Microscopía de contraste de fase: Se usa para aumentar el contraste entre las partes obscuras y claras de las células sin colorear.
• Microscopíade fluorescencia: Una sustancia natural en las células aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosas.

3.- Consultar dos técnicas de preparación de muestras biológicas para ser observadas, el microscopio compuesto y el microscopio electrónico.

COMPUESTO               ELECRTONICO

1- Fijación                    1- Fijación química o criofijación

2- Inclusión                  2- La inclusión en resinas

4.- ¿Que significa poder de resolución y apertura numérica?

• Poder deresolución: Capacidad de un microscopio de ver dos puntos en forma separada.
• Apertura numérica: Es un número adimensional que caracteriza el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz.

5.- ¿Por qué con el objetivo 100X se usa aceite de inmersión?

Porque conforme se incrementa la apertura numérica a través de las series de objetivos del mismo aumento, la capacidad de colección de la luz y la resolución se incrementa.